鲨鱼源性成分(Shark)试剂盒(荧光-PCR法)为上海沪峥主要产品,其特点灵敏性高 、特异性高,判断阴阳性结果标准,厂家供货,品质保证,价格优惠,欢迎来电咨询!
产品名称:鲨鱼源性成分(Shark)试剂盒(荧光-PCR法)
英文名称:Shark derived ingredients Detection Kit(Real-Time PCR Method)
包装:50T
【预期用途】动物源性成分广泛分布于食品、饲料、化妆品等,与人们的生活息息相关,其中食品和饲料所占的比例*。肉及肉制品掺假成为世界各国共同关注的热点问题,肉食品及其饲料的安全隐患直接关系到人类的安危。近几十年来,以 PCR 技术为核心的动物源性成分检测获得了广泛应用
本试剂盒适用于动物组织以及食品、饲料等样本中鲨鱼源性成分的检测。
【检验原理】
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,设计一对鲨鱼源性成分基因保守区特异性引物结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对狐狸源性成分基因保守区的DNA进行体外扩增检测,从而达到快速检测之目的。
鲨鱼源性成分(Shark)试剂盒(荧光-PCR法)在PCR 管中加入下列成分:
成份 |
样品 |
阳性对照 |
阴性对照 |
双酶一管式 RT-PCR Buffer, 2× |
15 uL |
15 uL |
15 uL |
EMCV 专一性引物对 |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
样品 RNA |
1-5 uL |
无 |
2 uL |
EMCV 阳性对照 |
无 |
2 uL |
无 |
补超纯水到 |
28 uL |
28 uL |
无 |
MMLV-Taq Mix |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
狐狸源性成分(Vulpes)试剂盒(荧光-PCR法)操作步骤
取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中, 8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
DNA 提取
样本 DNA 的提取采用 DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。试剂配制(试剂准备区)根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 |
Duck 反应液 |
酶液 |
用量 |
20μL |
1μL |
PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;荧光通道选择: 检测通道
(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。
4.3 推荐循环参数设置:
步骤 |
循环数 |
温度 |
时间 |
收集荧光信号 |
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
判断a) 检测通道 Ct 值≤30,有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线,判断样品为阳性。
b) 当 30值≤35 时,且有典型的扩增曲线时,则需重复实验。再次扩增后检测体系的Ct 值仍≤35,且有典型的扩增曲线,则判定该样品含有相应的动物源性成分。当再次扩增后,检测体系 Ct 值>35,或无典型的扩增曲线,则判定该样品不含相应的动物源性成分。
质控标准
a) 空白对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35,未出现典型的扩增曲线。
b) 阴性对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35,未出现典型的扩增曲线。
c) 阳性对照:有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线,Ct 值<30。
d) 以上应同时满足,否则本次实验无效。
PCR反应液请在冰中配制,然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法(Cool Start Method)与热启动法(Hot Start Method)相结合,更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应,增强PCR扩增的特异性,能得到良好的PCR结果。
PCR的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
鲨鱼源性成分(Shark)试剂盒(荧光-PCR法)特点
1,严格的质控体系:所有试剂盒从原料到成品经过严格的质控,确保试剂盒质量及稳定性
2,产品不断优化,很好的灵敏度;
3,综合指标特性,研发便捷操作的试剂盒;
4,检测验证样本多样;
5,专业的研发团队为客户提供个性化的定*务;
6,提供食品安全药物残留Elisa试剂盒,以及快检试剂盒
7,完善专业的售前售后服务
库存均有现货。
4.产品订购以订货当日*价格为准。
5.所有产品为确保质量,出库均复检。 Wnt1抗体,信号通路Wnt1抗体 Anti-GLUR3/GRIA 3 PEG3蛋白抗体 小鼠碳酸酐酶2(CA-2)ELISA试剂盒 胰岛素样生长因子结合蛋白-4抗体 人羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒 人碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒 小鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒 蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗体 兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒 性激素结合球蛋白抗体 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA试剂盒 人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒 Anti-Nrf2 Wnt1抗体,信号通路Wnt1抗体 不同类型抗体的保存指南, 用以避免抗体污染或损伤请不时核查数据表以获取特定保存建议。如果恰当保存和处理, 大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。 对于很多抗体而言, 分装成小等份并冻存于 -20℃ 或-80℃ 是*保存条件。分装成小等份可*程度减少由冻融造成的损伤, 以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次, 如有剩余, 可将剩余物保存于 4℃。在收到抗体时,在 10,000 × g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液, 并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10μl;等份越小, 储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
公司产品涵盖ELISA研发、PCR试剂盒,细胞培养,各种生化试剂、各种酶类、分子生物学试剂盒、培养基、自产实验室耗材、小型仪器等。此外、上海沪峥还代理了sigma,R&D,ScienCell,ATCC,wak0,omega,Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类*公司的产品。