基本原理 先用随机引物将 RNA 反转录成 cDNA，然后设计特异性的引物和荧光探针(TaqMan 探针),进行 荧光定量 PCR 检测。TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它设计为与目标序列上游引物和下游引物 之间的序列配对。荧光基团连接在探针的 5’末端，而淬灭剂则在 3’末端。当完整的探针与目 标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与 3’端的淬灭剂接近而被淬灭，但在进行延伸反应时， qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离,荧光强度得到检测。 随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累，因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。