实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程， 通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

【使用方法】

1.样品处理（样本处理区）

样本前处理：

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

2.DNA 提取

DNA 的提取采用DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.1试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

2.3步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号

1 1 cycle 95℃ 10min 否

2 40 cycles 94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

3结果分析判定

3.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

3.2判断

a)检测通道 Ct 值≤30，有 FAM 荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，判断样品为阳性。

b)当 30

4.质控标准

a)空白对照：无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35，未出现典型的扩增曲线。

b)阴性对照：无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35，未出现典型的扩增曲线。

c)阳性对照：有 FAM 荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，Ct 值＜30。

d)以上应同时满足，否则本次实验无效。