-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融不超过 5 次。有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g。

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过 6 个月，标本运送应采用 0℃冰壶。【使用方法】样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理：

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

2 DNA 提取

样本 DNA 的提取采用 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25ul；荧光通道选择： 检测通道

（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

4.3 推荐循环参数设置：

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

登革热病毒3型(DFV-III)试剂盒(荧光-PCR法)【注意事项】

1. 每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。
2. 所有试剂在要求温度下保存，尽量减少反复冻融，使用后的试剂应立即放回。
3. 本试剂盒为10头份量试剂，加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不 、定时不准确造成无结果情况，不予负责。
4. 吸头、离心管和PCR管在使用前，应高压灭菌。
5. 注意防止试剂污染，在有效期限内用完。