产品展厅
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牛腺病毒3型(BAV-3)试剂盒(荧光-PCR法)为沪峥生物主要产品，沪峥生物坚守品质、锐意进取，满足于每一位老师的实验要求，厂家供货，品质保证，价格优惠,欢迎来电咨询！
规格：50T/盒
本试剂盒用牛腺病毒3型(BAV-3)特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对牛腺病毒3型(BAV-3)进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学诊断。【储存条件及有效期】
-20℃避光保存、运输、避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【保存和运输】
牛腺病毒3型(BAV-3)试剂盒(荧光-PCR法)样品处理（样本处理区）
1. 样本前处理
组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中
1) DNA 的提取也可以采用 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
|
试剂 |
APP 反应液 |
酶液 |
|
用量（样本数为 N） |
20μL |
1μL |
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；
荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
|
步骤 |
循环数 |
温度 |
时间 |
收集荧光信号 |
|
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
|
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
|
55℃ |
30sec |
是 |
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35值≤38， 且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
? 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
? 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
? 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
? 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
? 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
? 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定 量检测不准确的结果；
? 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
? 所有操作严格按照说明书进行；
? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
? 反应液应避光保存；
? 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
? 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。
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