上海沪峥专业生产销售鲍氏不动杆菌(鲍曼不动杆菌)PCR试剂盒现货,
本试剂盒引物经过优化,反应特异性强,即开即用,欢迎新老客户咨询订购。,本试剂盒引物经过优化,反应特异性强,即开即用,欢迎新老客户咨询订购。
产品详细信息
中文名称:鲍氏不动杆菌(鲍曼不动杆菌)PCR试剂盒
英文名称:Acidovorax konjaci
产品规格:50T/盒
用途】用于鲍肌肉萎缩症病毒病毒病的检测、诊断和流行病学调查。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12个月。
提示:本品仅用于科研实验,不能用作医疗及临床诊断。
魔芋细菌性叶斑病菌PCR试剂盒使用方法
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;液体样品,直接取100μL提取
1.2 DNA提取
1) DNA的提取也可以采用(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
3. PCR扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;
荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光,选择None即可。
4.3 推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
结果判断
阳性:检测样本Ct值小于等于35.0,且曲线有明显的指数增长期;
可疑:检测样本Ct值大于35.0且小于40.0,重复一次实验,如果Ct值仍小于40.0,且曲线有明显的指数增长期,为阳性,否则为阴性;
阴性:检测不到样本Ct值或Ct值为40。
6. 对检验结果的解析
实验室环境污染,试剂污染,标本交叉污染会出现假阳性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。
7. 质控标准
阴性质控品:扩增曲线无对数生长期或无Ct值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显对数生长期,且Ct值≤32;
以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
6. 检测方法的局限性
? 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
? 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
? 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
? 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
? 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
? 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
? 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
魔芋细菌性叶斑病菌PCR试剂盒注意事项】
? 所有操作严格按照说明书进行;
? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
? 反应液应避光保存;
? 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
? 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理