产品名称：禽流感病毒H9亚型(AIV-H9)核酸检测试剂盒(RT-PC

检测方法： 实时荧光 PCR

规    格： 50T

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

产    地： 中国

用    途： 仅用于科研实验

订购流程禽流感病毒H9亚型(AIV-H9)核酸检测试剂盒(RT-PC

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ELISA常见问题：禽流感病毒H9亚型(AIV-H9)核酸检测试剂盒(RT-PC

利用ELISA进行检验常见的样本一般包括血液（指血，静脉血），尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等，这些样本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。

1、抗原：ELISA抗原有三类：液体中纯化的自然抗原、合成抗原和基因重组抗原。

纯度不高可导致试剂盒的特异性不强，合成抗原一般都是多肽抗原，

试剂盒一般为基因重组抗原。抗原纯度不高，特异性就不强，

2、抗体特异性和亲和力的大小会影响试剂盒的特异性和敏感性

3、酶结合物，试剂盒的保存时间通常由酶的稳定性决定。

最常用的就是辣根过氧化酶-HRP.其他还有碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶。

ELISA温浴和洗涤一般为磷酸盐缓冲液（PBS）

碱性磷酸酶的话就不能用PBS洗涤了，因为残留的PBS会抑制一半的酶活性。

TMB显色液取代了OPD为HRP最常用的色原底物。为氧化还原反应（OPD对机体有突变作用，所以改用TMB）

结果分析判定

结果分析条件设定
设置基线（baseline）：一般情况下，对ABI 7500、7700等仪器设为6-15cycle，对PE5700设为3-15cycle,对MJ Research Option2设为6-12cycle。特殊情况可对基线适当调整。
设置阈值（threshold）:以阈值线刚超过阴性对照扩增曲线（无规则的噪音线）的zui高点。
结果判断
阳性：检测样本Ct值小于等于35.0，且曲线有明显的指数增长期；
可疑：检测样本Ct值大于35.0且小于40.0，重复一次实验，如果Ct值仍小于40.0，且曲线有明显的指数增长期，为阳性，否则为阴性；
阴性：检测不到样本Ct值或Ct值为40

实验操作

1.模板制备（样本制备区）
建议使用配套水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒系列产品，具体过程详见产品说明书。
2.添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）
剪下所需测试数的已含有反应液的PCR管，放置在室温待解冻后，离心30秒后揭开封口膜，向每管反应液中分别加入5μL模板，顺序为NG、待测样品模板、PG-VH-P。盖好配套的PCR管盖后，涡旋混匀30s，离心1min，立即进行PCR扩增反应。
3. 扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量PCR仪，荧光基团选择FAM，淬灭基团选择TAMRA。

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