莱氏无胆甾支原体PCR检测试剂盒产品及特点:具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点,值得信赖的PCR技术新方法
产品名称:莱氏无胆甾支原体PCR检测试剂盒
英文名称:PCR Detection Kit for Acholeplasma Laidlawii
产品规格:20T/50T/100T
产品运输:低温运输
储存条件】 反应试剂盒存于-20 ℃保存,尽量避免反复冻融。
【有效期】 本试剂盒有效期为十二个月。
莱氏无胆甾支原体PCR检测试剂盒反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子*很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
莱氏无胆甾支原体PCR检测试剂盒注意事项:
1. 试剂盒各组份使用前请充分融化并摇匀,离心管内的试剂需离心数秒后使用。 2 PCR操作各阶段应在不同实验室进行。
3 在试剂和标本准备阶段使用负压超净台。
4 应穿工作服,戴一次性手套(经常替换手套),使用一次性用品。
5 PCR操作人员应具有经验和受过培训。
6操作过程中用到的超净台、移液器、离心机、扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或70%乙醇或 紫外灯处理。
7 阳性对照应和待检标本平行进行操作后方可进行PCR扩增。
8 使用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。
9本试剂盒仅供科研使用。