Cell Counting Kit-8（简称CCK-8），是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。 

CCK-8试剂中含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）是一种类似于MTT的化合物，它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）存在条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan （参考图1），生成的Formazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析，细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

保存条件：4℃避光保存，一年有效。-20℃可以储藏两年，但反复冻融会增加背景值，干扰实验测定，因此请将经常使用的试剂保存在4 ℃。 

操作事项：请参阅说明书

产品优势 

灵敏度高，线性范围宽，数据可靠，重现性好

操作简便，省时省力

水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞

无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低

为1瓶溶液，毋需预制，即开即用

适合于高通量药物筛选

检测效果与国外品牌相媲美

注意事项

建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

 CCK-8 反应时间的确定：一般情况下，白细胞显色比较困难，因此需要增加细胞数量和延长 CCK-8 反应时间。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色，因此悬浮细胞在加入 CCK-8 培养0.5-4小时后，可先从培养箱取出，目测或用酶标仪测定显色程度，若显色困难可以继续培养数小时后再确定。对于贴壁细胞，CCK-8 的培养时间一般为 0.5-4 小时，在培养 20 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度。

每孔接种细胞数：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔 (100 μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500个/孔 (100 μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

设定空白对照：在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验（细胞毒性实验）时，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。

影响CCK-8测定的物质：由于CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应，所以如果待测体系中存在氧化还原物质则可能会干扰检测结果，还原性物质会使吸光度增加，氧化性物质会使吸光度减小，因此应需设法去除这些物质的影响。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除只含有培养基的对照孔中本底吸光度而消除，因此不会对检测结果造成影响。

测定波长：如果样品为高浑浊度的细胞悬液，建议采用双波长进行测定，检测波长450nm，参比波长600-650nm。如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度*。

当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。

如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。

为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。