Q热立克次（CB）体试剂盒（荧光-PCR法）

规格：50T/盒

自备试剂：样品 RNA

【检验原理】

本试剂盒对Q热立克次（CB）基因保守区设计特异性的引物和探针[1-3]，用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

【储存条件及有效期】

-20℃避光保存、运输、避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。

结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

判断

阳性：检测通道Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线：

可疑：检测通道35

   且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

  阴性：样本检测结果Ct值＞38或无Ct值。

  6.质控标准

   阴性质控品：Ct值＞38或无Ct值显示；

   阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32

  以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

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