产品名称:转基因植物RNA-Leu基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
包装:48T
分类:pcr-荧光试剂盒
用途:本产品仅供科研与实验使用,不用于临床诊断等
目的:本试剂盒适用于检测疑似感染者或发病动物等组织、体液或淋巴结等标本中禽流感病毒rna,用于禽流感病毒感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
转基因植物RNA-Leu基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
转基因植物RNA-Leu基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 设置 RT-PCR 反应(30 uL 体系)
在PCR 管中加入下列成分:
成份 |
样品 |
阳性对照 |
阴性对照 |
双酶一管式 RT-PCR Buffer, 2× | 15 uL | 15 uL | 15 uL |
EMCV 专一性引物对 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
样品 RNA | 1-5 uL | 无 | 2 uL |
EMCV 阳性对照 | 无 | 2 uL | 无 |
补超纯水到 | 28 uL | 28 uL | 无 |
MMLV-Taq Mix | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
[1] 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 RT-PCR。
转基因植物RNA-Leu基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 电泳检测RT-PCR 产物。预期的PCR 产物长度为 286 bp。
转基因植物RNA-Leu基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 【参考值(参考范围)】
结果判定
1 结果分析条件设定 阈值设定原则:阈值线设定于刚好超过阴性对照扩增曲线的点。不同仪器可根据仪器噪音
情况进行调整。
2 结果描述及判定
阳性对照 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线,阴性对照无 Ct 值并且无特定扩增曲线,实验结果成 立;被检样品 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线为 AIV 阳性;被检样品 30<Ct<37 并出现特定的扩 增曲线,需重新取样提取 RNA,扩增后进行结果判定,如仍是可疑,可判定为阳性;被检样品 Ct 值≥37 时,超过本方法检测灵敏度范围,判定为阴性;对于某些未呈现 S 型曲线,但本底较高的样 品,应为阴性。