产品名称:猪弓形虫(TOX)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
检测方法: 实时荧光 PCR
规 格: 50T
保存方式: 2~8℃
有 效 期: 1年
产 地: 中国
用 途: 仅用于科研实验
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ELISA常见问题:猪弓形虫(TOX)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
利用ELISA进行检验常见的样本一般包括血液(指血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液,阴道分泌物等,这些样本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。
1、抗原:ELISA抗原有三类:液体中纯化的自然抗原、合成抗原和基因重组抗原。
纯度不高可导致试剂盒的特异性不强,合成抗原一般都是多肽抗原,
试剂盒一般为基因重组抗原。抗原纯度不高,特异性就不强,
2、抗体特异性和亲和力的大小会影响试剂盒的特异性和敏感性
3、酶结合物,试剂盒的保存时间通常由酶的稳定性决定。
最常用的就是辣根过氧化酶-HRP.其他还有碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶。
ELISA温浴和洗涤一般为磷酸盐缓冲液(PBS)
碱性磷酸酶的话就不能用PBS洗涤了,因为残留的PBS会抑制一半的酶活性。
TMB显色液取代了OPD为HRP最常用的色原底物。为氧化还原反应(OPD对机体有突变作用,所以改用TMB)
猪弓形虫(TOX)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
【检验方法的局限性】
1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的*检出限时可能会发生假阴性的结果。
2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。
3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。
【产品性能指标】 产品的*检出限为102 Copies/mL,产品CV值≤5%。
结果分析判定
结果分析条件设定
设置基线(baseline):一般情况下,对ABI 7500、7700等仪器设为6-15cycle,对PE5700设为3-15cycle,对MJ Research Option2设为6-12cycle。特殊情况可对基线适当调整。
设置阈值(threshold):以阈值线刚超过阴性对照扩增曲线(无规则的噪音线)的zui高点。
结果判断
阳性:检测样本Ct值小于等于35.0,且曲线有明显的指数增长期;
可疑:检测样本Ct值大于35.0且小于40.0,重复一次实验,如果Ct值仍小于40.0,且曲线有明显的指数增长期,为阳性,否则为阴性;
阴性:检测不到样本Ct值或Ct值为40。
6. 对检验结果的解析
实验室环境污染,试剂污染,标本交叉污染会出现假阳性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。
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