产品名称：猪链球菌(通用型、2型）检测试剂盒（双色实时荧光PCR法）

检测方法： 实时荧光 PCR

规    格： 50T

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

产    地： 中国

用    途： 仅用于科研实验

猪链球菌(通用型、2型）检测试剂盒（双色实时荧光PCR法）

电话或通过在线客服咨询产品→确定产品→提供单位收货信息→确立合同→安排发货。

 1.报价含普票、运费。
 2.进口原装产品要3-6周的货期，详细情况请咨询客服。
 3.订货时间为工作日每周一至周五17:00之前。
 4.如因单位财务制度原因，可申请先发货，报账后付款（此条款仅限医院、学校信誉良好的 客户）。

猪链球菌(通用型、2型）检测试剂盒（双色实时荧光PCR法）

利用ELISA进行检验常见的样本一般包括血液（指血，静脉血），尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等，这些样本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。

1、抗原：ELISA抗原有三类：液体中纯化的自然抗原、合成抗原和基因重组抗原。

纯度不高可导致试剂盒的特异性不强，合成抗原一般都是多肽抗原，

试剂盒一般为基因重组抗原。抗原纯度不高，特异性就不强，

2、抗体特异性和亲和力的大小会影响试剂盒的特异性和敏感性

3、酶结合物，试剂盒的保存时间通常由酶的稳定性决定。

最常用的就是辣根过氧化酶-HRP.其他还有碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶。

ELISA温浴和洗涤一般为磷酸盐缓冲液（PBS）

碱性磷酸酶的话就不能用PBS洗涤了，因为残留的PBS会抑制一半的酶活性。

TMB显色液取代了OPD为HRP最常用的色原底物。为氧化还原反应（OPD对机体有突变作用，所以改用TMB）

◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
   1）第一区：样本制备区。
 2）第二区：模板添加区。
   3）第三区：扩增及产物分析区。
   ★ 分区之间*进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

操作步骤
1  病毒 RNA 的提取
1.1  取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液 600 μL，充分颠倒混匀，室温静置 3～

5 min。

1.2  将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时 堵塞吸附柱），13000 rpm 离心 30 s。

1.3  弃去收集管中液体，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 离心 30 s。

1.4 重复步骤 1.3。

1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm 空柱离心 2 min，以除去残留的洗涤液。

1.6  将吸附柱移入新的 1.5 mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液 50 μL，室温静置 1 min，13000 rpm

离心 30 s，离心管中液体即为模板 RNA。

2  实时荧光 RT-PCR 操作
设被检样品、阴性对照和阳性对照总和为 N，则反应体系配制如下： 试剂 体系



无菌无核酸酶水 2.7（N+1）μL

RT-PCR 反应液 10（N+1）μL

酶混合液 0.4（N+1）μL

荧光探针 1.9（N+1）μL



将以上配制的反应体系充分混匀后，分装每个反应管中各 15 μL。

分别取 5 μL 模板 RNA，加入相应反应管中，混匀并作好标记，在荧光 PCR 仪上进行以下反应：

45 ℃ 15 min，95 ℃ 1min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，在每个循环第二步（60℃ 35s）收集荧光信号，共

40 个循环。（报告基团“FAM”，淬灭基团“None”）。