产品名称:对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(实时荧光PCR法)
包装规格】50T/100T
【储存条件及有效期】2~8℃,有效期为12个月。
产品简介】
本产品基于恒温核酸扩增技术,在恒温条件下对对虾白斑综合症病毒(WSSV)特异基因片段进行扩增及检测,并针对各种样品进行反应体系的优化,可在极短时间内给出准确的检测结果。
· 可检测样本
水产活体:亲虾、虾苗、鱼类、贝类、蟹类
产品特点】
快速检测:60分钟内完成检测,实时荧光检测仪可判读结果。
特异性强:针对靶基因的6个区段设计引物,保证扩增特异性。
灵敏度高:比传统PCR灵敏度高。
操作简单:一步加样后,65℃恒温条件下即可完成扩增。
对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(实时荧光PCR法)【检验原理】
本试剂盒根据对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因组设计特异性引物和探针,用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名 称 规 格
核酸提取液 1.5mL×2 管
酶液 50μL×1 管
反应液 1.0mL×1 管
阳性质控品 50μL×1 管
阴性质控品 250μL×1 管
注:
1)不同批号试剂不能混用。
2)试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 7 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀猪,取分泌物、血液、*、扁桃体、*和淋巴结等
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【使用方法】
1.样品处理(样本处理区)
1.1样本前处理
组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;全血样本:待血凝固后,取血清 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2DNA 提取
1)对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒温处理 10min,13,000
rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
2)DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒
(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2.试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 ASFV 反应液 酶液
用量(样本数为 N) 20μL 1μL
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。
3.加样(样本处理区)
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4.PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;
荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)
NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。
5.2结果判断
阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(实时荧光PCR法)【注意事项】
所有操作严格按照说明书进行;
试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀幵短暂离心;
反应液应避光保存;
反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,幵按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理